Последние конференции
- Информационные системы и модели в научных исследованиях, промышленности, образовании и экологии
- Информационные системы и модели в научных исследованиях, промышленности и экологии
- Современные проблемы экологии
- Экологические проблемы окружающей среды, пути и методы их решения
- Экология, образование и здоровый образ жизни
Создание молекулярно-клеточной модели гематоэнцефалического барьера in vitro
А.В. Моргун, Н.А. Малиновская, А.Б. Салмина, Е.А. Пожиленкова,
Н.В. Кувачева, Е.С. Гагарина
Красноярский государственный медицинский университет
им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого,
НИИ Молекулярной медицины и патобихимии,
г. Красноярск
Цель исследования - определение условий выделения и культивирования клеток (астроциты и эндотелиоциты) для создания модели гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) in vitro; исследование особенностей выращивания комбинированных слоев клеток, разработка протокола последовательности нанесения монокультур клеток и времени сокультивирования.
Объект исследования – белые беспородные крысята в возрасте 3, 5 и 7 суток (для выделения астроцитов – 3, 5 и 7-суточные крысята, эндотелиоцитов - 5 и 7-суточные). Обнаружено, что оптимальный возраст крысят для забора материала с целью выделения астроцитов – 5 и 7 суток, эндотелиоцитов – 7 суток. Для выделения астроцитов забирали гипокамп, кору головного мозга или мозжечок, для эндотелиоцитов – кору головного мозга. Для посева клеток при их выделении использовались стерильные культуральные чашки Петри с полилизиновым покрытием. Инкубация проводилась в условиях CO2-инкубатора при содержании 5 % CO2 в течение 8-9 суток для нейроцитов и до 12 суток для астроцитов и эндотелиоцитов при замене 1/3 среды каждые 3 суток и при использовании питательной среды, предварительно насыщенной 5 % CO2 в CO2-инкубаторе в течение 30 минут до посевов и смены среды. Для пересевов выделенных клеток и поддержания культур использовали чашки Петри без полилизинового покрытия, планшеты или флаконы. Время образования монослоя клеток для эндотелиоцитов составляет 2-3 суток, для астроцитов - 3-4 суток. Время для поддержания клеточного монослоя для эндотелиоцитов и астроцитов до 12 суток с момента выделения. Наиболее оптимальными сроками для забора материала из монослоев с целью последующего сокультивирования для эндотелиоцитов являются 2-12 сутки с момента выделения, для астроцитов - 3-12 сутки; последовательность нанесения монокультур клеток: сначала эндотелиоциты, затем астроциты. Протокол простейшей модели гематоэнцефалического барьера (ГЭБ): нижний слой – эндотелиоциты, через 1-2 суток верхним слоем наносятся астроциты, полученная сокультура может использоваться 10-11 суток с момента ее получения.
Таким образом, в результате выполнения работы определены условия для создания молекулярно-клеточной модели ГЭБ in vitro: особенности выделения и культивирования астроцитов и эндотелиоцитов, исследованы особенности выращивания комбинированных слоев клеток, разработан протокол последовательности нанесения монокультур клеток и времени их сокультивирования.